Reveal®2.0沙门氏菌检测系统

Reveal^®2.0沙门氏菌检测系统

不用时将检测条储存在15-30^oC，将干粉培养基储存在室温下（15-30^oC）

主要用途

    Reveal^®沙门氏菌检测系统可用于快速鉴定食品及，物饲料和环境样品中沙门氏菌，完成对沙门氏菌的检测和初步鉴别只需要24小时。

测试原理

本系统利用REVIVE培养基，它能够为沙门氏菌提供易利用的营养成分，以及其它对受胁迫或损伤状态下的沙门氏菌进行恢复的必要因子。用REVIVE培养后，选择性富集培养可使沙门氏菌生长到能够被Reveal检测条检出的水平。Reveal检测详述如下:

对于一些样品，初的非选择性培养可以饶过，直接将样品引进到RV培养基中。

对于那些非常黏稠，含色素，或者包含水平无法生活细胞的样品，可选择的第三种富集方法能够检测到其含有的沙门氏菌。在食品工业中，使用M肉汤培养是几种的确定标准程序中的好选择。

将少量富集培养物（120μl）放到样品杯中，将检测条浸入到样品并在环境温度下保持15分钟。样品通过毛细管作用渗过含特异性沙门氏菌抗体（与胶体金颗粒相偶联）的试剂区。如果样品中存在抗原（即沙门氏菌），它将与胶体记的抗体结合。该抗原-抗体复合物渗过试剂区，经过含有沙门氏菌抗体（分布呈带状）的硝化纤维膜。该含金免疫复合物被捕获并聚集在这个区域，从而显示一条可见的线。剩余的样品继续迁移而进入位于膜末端的废液贮存处。

试剂区也含有针对广谱抗原的金复合物（指示剂），无论沙门氏菌存在与否，它都会被样品溶液释放。胶体金复合物对照指示剂通过膜迁移到阴性对照捕获区（含针对广谱抗原的抗体区），捕获并集结成一条可见线。无论沙门氏菌抗原存在与否，都会在质控区形成对照线，以检测过程操作正确无误。

主要使用者

    Reveal 2.0沙门氏菌测试系统旨为熟悉沙门氏菌分离与鉴定中无菌操作技术的人员而设计的。建议不具备微生物基础知识的使用者参加Neogen公司的技能培训。

提供的材料

      Reveal检测条

      20个沙门氏菌检测条

      20个移液管

      20个反应杯

      REVIVE培养基

      20瓶REVIVE培养基

      20个培养袋

      量杯

      二次选择性培养基

      20装2倍浓缩的RV培养基（2×RV）

      20个培养袋

量杯

     直接选择培养基

      20瓶1×RV培养基

      20个培养袋

量杯

试剂盒不提供的必需品

天平（小刻度25g）

计时器

样品杯架

无菌水

能保持36^oC及42^oC的培养箱

可选择的设备

Reveal AccuScanⅢ 读数仪器

均质器 

储藏

    不用时，检测条应储存于15-30℃；干粉培养基储存在室温下（15-30℃）。

不同物品的检测

本产品可有效地用于许多物品中沙门氏菌的检测。还可从Neogen公司获得，本产品进行沙门氏菌检测的物品明细表，同时备有对于不同物品检测时的富集方法。

警惕

1 不要使用过期的培养基

2 打开装检测条的瓶子前，让检测条升至室温

3 使用水化培养基须在6小时内准备

4 培养时间和温度尤为重要，否则会导致错误结果

5 在培养过程中样品袋不能扎得过紧，以便于空气交换；这对沙门氏菌生长及抗原表达至关重要

6 水化REVIVE培养基时无菌水应该升至42^oC，水化RV培养基时无菌水应是36^oC

7 选择性富集的培养物的检测应在培养后的6小时内完成

8采用良好微生物实验室操作规程

1 样品准备及预培养

  样品富集1—适用于大多数食品和环境样品

1 将1瓶REVIVE培养基（9705）或者7.2g大瓶装的REVIVE培养基（9708）倒入培养袋中，加入200ml预热至42℃的无菌水，抓牢袋子离顶部2-3英寸处并用力混匀，直到溶解；

2 将25g样品（样品的温度必须与室温一致）加到含有REVIVE培养基的培养袋中，抓紧袋子并使样品混匀，用一边到另一边的方式剧烈晃动袋子，使确保混匀；参考办法：将袋子放到均质器内，用正常速度下混匀30秒钟。

3 松散地紧闭袋子（见“警惕”第5步），放进合适的架子或支撑物，36±1℃培养4小时

4将1瓶浓缩的2×RV培养基（9715）或者10.6g大瓶装的RV培养基（9716）倒入培养袋中，加入200ml预热至36℃的无菌水，抓牢袋子离顶部2-3英寸处并用力混匀，直到溶解,在使用前保持在42℃

5将REVIVE培养袋子从36℃的温箱取出放到合适的架子或支撑物上

6向样品袋内（共200ml）加入200ml预热到42℃的预先制备的选择性RV培养基，抓牢袋子离顶部2-3英寸处并用一边到另一边的方式轻轻混匀

7松散地扎上袋子口，并将其放到架子或支持物上，42^oC培养16-24小时

样品富集2—适用与挑选的食品，包括生的碎牛肉，生的碎家禽肉，生海鲜，家禽冲洗水

1将1瓶1×RV培养基（9729）或者5.3g大瓶装的Rv培养基（9716）倒入培养袋中，加入200ml预热至42℃的无菌水，抓牢袋子离顶部2-3英寸处并用力混匀，直到溶解；

2将25g样品（样品的温度必须与室温一致）加到含有1×RV培养基的培养袋中，抓紧袋子并使样品混匀，用一边到另一边的方式剧烈晃动袋子，使确保混匀；参考办法：将袋子放到均质器内，用正常速度下混匀30秒钟。

3松散地扎上袋子口，并将其放到架子或支持物上，42^oC培养20-24小时

样品富集3—适用与潜在的困难样品，包括干的宠物食品，高黏性或者高色素原料

1 将1瓶REVIVE培养基（9705）或者7.2g大瓶装的REVIVE培养基（9708）倒入培养袋中，加入200ml预热至42℃的无菌水，抓牢袋子离顶部2-3英寸处并用力混匀，直到溶解；

2 将25g样品（样品的温度必须与室温一致）加到含有REVIVE培养基的培养袋中，抓紧袋子并使样品混匀，用一边到另一边的方式剧烈晃动袋子，使确保混匀；参考办法：将袋子放到均质器内，用正常速度下混匀30秒钟。

3 松散地紧闭袋子（见“警惕”第5步），放进合适的架子或支撑物，36±1℃培养4小时

4将1瓶浓缩的2×RV培养基（9715）或者10.6g大瓶装的RV培养基（9716）倒入培养袋中，加入200ml预热至36℃的无菌水，抓牢袋子离顶部2-3英寸处并用力混匀，直到溶解,在使用前保持在42℃

5将REVIVE培养袋子从36℃的温箱取出放到合适的架子或支撑物上

6向样品袋内（共200ml）加入200ml预热到42℃的预先制备的选择性RV培养基，抓牢袋子离顶部2-3英寸处并用一边到另一边的方式轻轻混匀

7松散地扎上袋子口，并将其放到架子或支持物上，42^oC培养16-24小时

8加入10ml 36℃的无菌水到1瓶M肉汤培养基（9722）中，握紧摇动来溶解该培养基

9移取1ml REVIVE/RV的培养液到溶解的M-肉汤内

10 36^oC培养下6小时

检测条检测过程

   1. 从培养箱中取出样品袋，混匀，取200ul或者8滴到样品杯中

2. 从装检测条的瓶中取出沙门氏菌检测条

3. 将检测条按箭头向下端浸入到有样品的样品杯中，放置15分钟

4 . 15分钟后读取结果

• 结果的解释

外观表现                                                  

15分钟内在质控区和检测区都出现显色线，结果为阳性；

15分钟时只有质控区出现显色线，结果为阴性；

如果质控区没有显色线，则检测无效，需要用另一个检测条检测；

超过20分钟读取结果是不正确的；

可选择的电子解释

根据Reveal AccuScan仪器说明书的操作，将检测条放到该仪器上，观察屏幕提示读取并记录结果

说明： 如果沙门氏菌存在，检测条上的检测区会形成一条明显的线，线深浅的程度与沙门氏菌的血清变型或含量有关，如果出现明显可见的线条，不管深浅如何，样品都将视为阳性。

从RV培养基中迁移出来任何蓝色到检测条中都不影响结果。

• 确认

建议用Reveal富集培养初步鉴定为阳性的样品应该采用BAM或者BLG中的涂布平板法确认。

说明： 用BAM或MLG方法检测一个“复制”的“亚样品”的结果并不一定与Reveal检测的结果一致！细菌并不是均匀的分布于样品中（对于固体或干的样品更是如此），因此，复制的亚样品可能不含有沙门氏菌。

用品的处理

按照当地州或联邦政府实施的所有相关规定处理（高压灭菌或漂白粉漂白等方法处理）Reveal检测装置，移液管，培养基等。